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求教高手！！基因组DNA电泳现象：电泳图分析一下（分布不均的原因，移动速率的影响因素）还有偶的结果

2024-12-04 20:46:58

推荐回答（2个）

回答（1）：

你的这个电泳图基本上都可以看到主条带，从上往下第一条很清晰的条带就是基因组DNA，这条条带除了二号基本是比较完整而明亮的，做下游操作基本没啥问题。二号不是没有，而是量低了。四号和五号可以看到点样孔里面有些明亮的东西，这些是蛋白污染或者盐离子含量过高的特征，但从主要条带上看并没有影响到它们的迁移率，所以污染不是很严重。所有的样品主条带以下没有一个很明显的拖尾现象，证明DNA机械损伤并不严重。你后面那一片很亮的东西，其实不是DNA，应该是RNA。你做过RNA消化么？建议溶解DNA后，添加外源性的RNase，37度消化1小时左右做电泳。消化之后的DNA电泳就不会有下面那一片明亮的东西了。然后啊，实际上后面那一片RNA带其实对后续操作没有多少影响的，你可以不去管它，如果你要作图，那么建议消化RNA后再跑。最后一个问题，你跑基因组DNA不跑Marker的么？你最好跑一个hindIII digest marker或者类似的marker,因为琼脂糖凝胶只能分辨20kb以下的DNA片段，高于20kb的片段迁移率和20kb的marker迁移率是一致的。所以基因组DNA电泳使用一个拥有20kb左右条带的marker可以帮助你确定你的DNA纯度，因为蛋白污染严重的情况下蛋白会阻碍DNA迁移出胶孔的速率，使得DNA主条带出现在20kb以上，并且条带和孔之间会有一片拖带。这样能更好的确定DNA的质量。

回答（2）：

上样量太大了

其他感觉比较正常

跑的质粒？