大致思路是根据已知编码序列，设计上下游引物，PCR得相应DNA片段，再根据需要，限制酶切链接到质粒中。
虽然EGF只有50多个氨基酸残基，但这个基因含有多多个内含子，因此，你需要做逆转录PCR。
1，根据已知序列，设计好上下游引物，引物根据你目标质粒的特点设计上下游酶切位点。
2，找EGF高表达的细胞，因为是人的EGF，不太容易直接取EGF高表达的器官或组织，但很容易找到有EGF高表达的细胞系。养细胞，提RNA。
3，以你提的RNA为模板，用PCR仪做逆转录PCR，产物为GEF编码区DNA片段。
4，限制酶切DNA产物何质粒，再连接酶连接，就构建好质粒。
5，转化或转染到细菌或细胞，就能表达EGF蛋白了。
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