如何确定是外显子突变或者基因拷贝扩增

2024-12-05 13:49:23
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应用基因扫描法检测人表皮生长因子受体(EGFR)基因19外显子缺失突变。方法:(1)将EGFR基因19外显子缺失(delE746-A750)型及野生型基因分别克隆到T载体,并将含突变型基因及含野生型基因的载体按l:1、1:5、1:10、1:50、1:100、1:300的比例进行混合,用基因扫描法检测19外显子的缺失.以确定其灵敏度。(2)基因扫描法检测225例非小细胞肺癌患者的手术组织或穿刺标本;荧光标记EGFR基因19外显子的上游引物,PCR扩增目的片段,3100A测序仪进行基因扫描,Gene Scan Genotyper3.5软件分析结果。同时用直接测序法检测EGFR19外显子的缺失突变。结果:(1)基因扫描法可测出1:100混合液中的突变型,灵敏度较高。(2)225例肺癌标本,可检测出27例(12.0%)缺失;直接测序法则检出25例(11.5%)缺失突变。结论:基因扫描法检测EGFR基因19外显子的缺失,方法简便,成本低廉,敏感度高,可查出1%的突变。