没有序列识别的功能，他就是简单的催化相邻DNA链的5-P末端和3'-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶。不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。
