PCR共分几步？

PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法，主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链（因其反应过程有高温，所以反应所用的聚合酶必须为热稳定DNA聚合酶）。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。

预反映-变性-退火-链延伸-充分延伸

1，准备试剂
2，准备DNA
3，按照步骤加样
4，混匀
5，上机PCR
that's all

标准的PCR过程分为三步：
1.DNA变性
　　（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA
2.退火
　　（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3.延伸
　　（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。
　　每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。如图所示：
　　现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。