粗多糖的提取中,用了6次的EDAE凝胶层析柱流速过慢,怎样去活化?

2024-11-06 11:37:06
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回答(1):

EDAE是哪种凝胶柱?
是不是弱阴离子交换柱DEAE?
如果是DEAE的话给你一点清洗的参考
一,在位清洗
1, 用2M的NaCl至少清洗2个柱体积。
2, 用1M的NaOH 至少清洗4个柱体积。
3, 用2M的NaCl至少清洗2个柱体积。
4, 用至少2个柱体积的蒸馏水润洗层析柱。

二,去除沉淀的蛋白质:
1, 注入一个柱体积的胃蛋白酶(1mg/ml in 0.5M NaCl,0.1M acetic acid)。室温过夜或37°作用1小时。
2, 用至少2个柱体积的蒸馏水润洗层析柱。
3, 用至少4个柱体积的储存缓冲液冲洗。
也可以选用如下操作
1, 用6M盐酸胍冲洗2个柱体积。
2, 立即用pH7-8的缓冲液冲洗至少5个柱体积。
3, 用至少2个柱体积的蒸馏水润洗分离柱。
4, 用至少4个柱体积的储存缓冲液冲洗。

三,去除脂类,疏水结合蛋白质或脂蛋白:
1, 如需彻底除去此类污染物,可使用有机溶剂或去污剂。
2, 在使用有机溶剂前,用蒸馏水冲洗填料至少4个柱体积以避免盐类沉淀于层析柱中。
3, 在使用有机溶剂或溶液时,需要减小流速以避免分离柱超压。
4, 清洗溶液最大浓度如下,100%的异丙醇,100%的甲醇,100%的乙腈,2M的氢氧化钠,75%的乙酸,100%的乙醇,离子性或非离子型去污剂。
5, 避免使用阴离子去污剂。