PCR的退火时间要把握严格,太长的话会导致变性的DNA两条链重新连接,影响下面的延伸过程;如果时间过短的话,会导致引物没有与DNA链完全连接,导致延伸失败或复制错配
退火很重要,太长会导致模板自连太短会导致引物连接不充分 无关,长片段PCR需增加的是延伸时间