A、基因工程的第一步提取目的基因，为了防止黏性末端任意连接，可选用两种不同的内切酶对基因和质粒进行切割，这样做可使目的基因和质粒产生不同的末端，从而可防止黏性末端任意连接，A正确；
B、为检测抗虫基因是否成功表达，抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．用虫食用棉花，观察其存活情况，来鉴定棉花是否具有抗虫特性．而不是用“离体棉花叶片组织”放在含卡那霉素的培养基上．B错误；
C、抗性基因是一段DNA，有可能被一些特定的限制酶进行切割．C错误；
D检测基因工程是否成功，不是看是否检测到抗虫基因，而①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--用DNA分子杂交技术、②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术、③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．D错误；
故答案为：A．
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