58问答库 > 在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切体系中，反应体系是什么？或者这两种酶在体系中的比例是多少？请指教！

在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切体系中，反应体系是什么？或者这两种酶在体系中的比例是多少？请指教！

请有经验的前辈多多指教！！！

2024-11-02 23:30:52

推荐回答（2个）

回答（1）：

反应体系应该指的是，两种酶同时使用时，应该用的buffer系统，且每一种酶的用量，DNA的用量，以及保证酶量不超过总反应体积的1/10，即20ul体系中，两个酶的总量不能超过2ul。

你可以在内切酶公司网站上查到推荐的反应体系：

从图上看，这两个酶在不能再另一个酶的推荐buffer中使用，只能用2X Tango buffer进行双酶切，而从酶活性上来看，XbaI在2X Tango中，活性50-100%，而XhoI则是100%，所以如果两个酶要调整用量的话，XbaI需要是XhoI用量的2倍，但就是酶总量不能超过总体积的10%。

回答（2）：

　　如果要精确计算的话，需要根据DNA的量和酶的量进行计算。限制酶的活性在管子上都有说明。
　　如果不精确的话，10微升体系中加入0.5-1微升酶都可以。