如何判定配制的培养基灭菌是否彻底

如果怕高压不充分，灭菌不彻底，可一每次多配置一小份同样的培养基，高压后放置培养箱中，如果该小份培养基出现大量菌增殖现象，说明灭菌不充分，反之则是无菌的。

普通培养基为121摄氏度20分钟，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。经灭菌后如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜，半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。

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注意事项：

1、记住达到所需压力的时间，通常灭菌要求1.1kgf/cm2，锅内达121℃，按不同灭菌要求维持压力15-40分钟。

2、不能随意延长灭菌时间和增加压力。培养基要求比较严格，既要保证灭菌彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，琼脂在长时间灭菌后凝固力也会下降，以致不凝固。

3、当冷却被消毒的溶液时，必须高度注意，如果压力急剧下降，超过了温度下降的速率，就会使液体沸腾，从而培养容器中溢出，导致培养基沾污瓶口等造成污染。务必缓慢放出蒸汽，当压力逐渐降至零后，才能打开盖子。

参考资料来源：百度百科-灭菌

参考资料来源：百度百科-培养基

把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数瓶，标上记号，置室温一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化（未长菌），说明灭菌效果良好。

灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。

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一、灭菌的基本要求

1、重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应先清洁，再进行消毒或灭菌。

2、耐热、耐湿的手术器械，应首选压力蒸汽灭菌，不应采取化学消毒剂浸泡灭菌。

3、环境与物体表面，一般情况下先清洁，再消毒；当受到患者血液、体液等污染时，先去除污染物，再清洁与消毒。

二、培养基配制原则：

1、选择适宜的营养物质

总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源。

2、营养物质浓度及配比合适

培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用

3、控制pH条件

培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。

4、原料来源的选择

在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。

参考资料来源：百度百科—培养基

参考资料来源：百度百科—灭菌

不接菌种不倒平板，培养基原封不动的空培养观察3-4天。

不接任何菌种的空白培养3～4天。

把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的结构不合理等原因所致，应根据上述情况进行改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明能彻底灭菌后，以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。
经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。