用18s rRNA做RT-PCR的内参时,可以用oligo dT做反转录吗?

2025-03-22 20:27:45
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回答(1):

这个是不行的,需要用random primers来做反转录引物。

oligo dT适合真核生物的mRNA的反转录,而这个 rRNA不同于mRNA,没有polyA尾巴,因此用oligo dT是不能反转录出rRNA的。

反转录过程由反转录酶催化,该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶(RDDP),即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA(cDNA)。

反转录酶存在于一些RNA病毒中,可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒(HIV)也是一种RNA病毒,含有反转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有反转录酶,推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。

扩展资料

实际上,用18S rRNA做内参,反转录RNA用Oligo dT,能够扩增出来时,对结果也不要表示怀疑.因为普通条件下的反转不会很纯粹,mRNA的含量在总RNA中只占5%,反转时不是仅有它被反转录,即使是rRNA也是可以部分反转成CDNA的。

要不分离纯mRNA怎么要用试剂盒进行进行磁珠吸附呢。另外,没有反转的rRNA和tRNA如果没用RNA酶处理也是可以存在很长时间才会完全降解的。这样的18S rRNA做内参是不合适的,它的表达会隋时间推移降低的。

回答(2):

这个是不行的,需要用random primers来做反转录引物。
oligo dT适合真核生物的mRNA的反转录,而这个 rRNA不同于mRNA,没有polyA尾巴,因此用oligo dT是不能反转录出rRNA的。