什么是灵芝菌种的矿油封藏法？

矿油封藏法：矿油也称为液体石蜡，故也称为液体石蜡保藏法（图10）。是将灭菌的液体石蜡注入到待保藏的灵芝菌种斜面上，使菌种与外界空气隔绝。其作用是隔绝氧气交流、防止培养基水分蒸发、降低微生物的新陈代谢活动、推迟菌种老化，达到延长培养物的生命，从而延长保存时间的目的。

图10 液体石蜡保藏法

1.橡皮塞 2.标签 3.液体石蜡 4.菌苔 5.琼脂培养基

（1）矿油的灭菌

将液体石蜡装入三角瓶中（装至瓶体积的1/3），塞好棉塞，同时准备一套装有虹吸管的与三角瓶配套的橡皮塞，用纸包扎好，一起放置到高压灭菌锅中消毒，在1.1千克/厘米²压力下灭菌30分钟。然后将装有石蜡的三角瓶置于40℃温箱中，放置10天左右，使液体石蜡中的水分蒸发干净，备用。

（2）接种培养

将需要保藏的灵芝菌种，接入到适宜的斜面培养基上，接种后，放置到最适宜温度下培养，待斜面长满健壮菌丝后，即可取出注蜡。

（3）灌注石蜡

在无菌室内，将无菌的带有虹吸管的橡皮塞装到液体石蜡的三角瓶上，然后用虹吸管将液体石蜡注入到斜面培养基内，以液面高出斜面培养基顶部1厘米为宜。

（4）封闭棉塞保藏

将灌注好液体石蜡的试管加棉塞，外包塑料薄膜或将试管口外多余的棉塞剪去，用石蜡涂于棉塞顶部及管口的四周，然后再用牛皮纸包扎试管。也可用无菌的橡皮塞代替棉塞。将试管置于冰箱或室内阴凉干燥处保藏。要定期检查，发现培养基露出液面必须及时补加无菌液体石蜡。

（5）恢复培养

恢复培养时不必倒去石蜡，用接种工具从斜面挑取菌丝块，尽量滴尽附带的石蜡，移植到新的培养基上，必须经过两次转接，才能获得正常生长的菌丝。液体石蜡易燃，使用时要注意防火。移接时，接种工具尽量少带蜡，避免因蜡在火焰灭菌时，爆炸飞溅。