pcr引物设计过程中，为什么GC过多易出现非特异性条带。为什么降低退火温度会使非特异性增高。跪求大牛指导

2024-10-31 11:36:11

推荐回答（2个）

回答（1）：

GC含量高，说明解链温度高，目的条带在较高温度才会解链，而在未达到解链温度时，引物会以未完全解链的DNA为模板，进行PCR非特异性扩增，所以易出现非特异性条带。降低退火温度，DNA复性减缓，增加非特异性互补机会，使非特异性条带增多。

回答（2）：

1.G与G可以非特异性配对，易非特异性扩增；
2. GC含量高则Tm值高，降低温度增加了非特异性互补的机会，易非特异性扩增。