PCR反应退火温度的高低与什么因素有关

退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素。

引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量，但引物与模板间的错配现象也会增多，导致非特异性扩增上升。

相反，提高退火温度虽然可以提高反应的特异性，但会引起扩增效率下降，甚至无扩增产物出现衡好。引物的退火温度可以通过Tm=4(G+C)+2(A+T)公式组略估算，一般在算出的Tm值上减去5摄氏度极为较合适反应设计退火温度。

扩展资料：

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。

由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术咐裤铅的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1976年，中国科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

引物退火：退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。 

引物延伸：引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短纯指而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。

参考资料：百度百科-聚合酶链式反应

退火温度是影响PCR反顷基应特异性的重要因素。引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量，但引物与模板间的错配现象也会增多，导致非特异性扩增上升空猜。相反，提高退火温度虽然可以提高反应的特异性，但会引起扩增效率下降，甚至无扩增产物出现。引物的退火温度可以通过Tm=4(G+C)+2(A+T)公式组略估算，一般在算出的Tm值上减去5摄斗乎型氏度极为较合适反应设计退火温度。

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