荧光分光光度法怎么选择激发波长和发射波长

2025-04-13 01:49:37
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回答(1):

比较最大激发波长和最大发射荧光波长的荧光强度意义不大。这是因为检测到的激发峰和发射峰只是从样品发出来的光的一小部分,并且检测到激发峰的原因是由于激发光在经过样品和空气时发生、折射、散射等因素才进入发射单色器被检测器检测到。
一般来说,比较荧光最大激发波长和荧光最大发射波长处荧光的强度从一些应用上可以说明该荧光物质的荧光效率,也就是这种荧光物质在最佳激发波长条件下可以发出荧光光子的多少。

回答(2):

相同点:
(1)两者都属于吸收光谱;
(2)样品定量基础相同,均遵从朗伯-比尔定律;
不同点:
(1)双波长等吸光度法不需空白溶液作参比;
(2)单波长等吸光度法吸光度a受光源强度影响,双波长等吸光度法吸光度a与光源强度无关;
(3)双波长等吸光度法灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长分光光度法好;
(4)单波长等吸光度法,采用单色光路(束)或双色光路测量;双波长等吸光度法需要两个单色器进行测量;