我感觉你一抗孵育时间过久，可尝试下室温孵育4h，抗体可用BSA稀释，在孵育的过程中接着封闭，再者可能你洗膜太着急，洗的时间太短，做实验还是要有耐心的，结果会回报你的 至于发光底物，其实国产的一点也不差，我们实验室常用的是北京赛智创业的SageBrightness系列ECL底物，检测灵敏度比Thermo还高些，仪器也用的这个公司的SmartChemi，一直都不错。希望我的意见能帮到你，大家互相学习
一抗4度孵育,你先常温2小时，再放低温过夜，直接放进去效果不太好，而且你确定你的抗体没问题？
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