灵芝原种接种也称为二级菌种，一般用玻璃广口瓶或罐头瓶生产。灵芝原种的接种过程也要严格遵守无菌操作规程。用右手拔去灭过菌培养基广口瓶的棉塞，将瓶固定在瓶架上，并靠近火焰1厘米左右的无菌区，取母种试管，酒精擦拭管壁，去棉塞后在火焰上烧灼管口，接种铲经过火焰火苗，迅速插入试管内，冷却后取2厘米大小一块母种，送入菌种瓶内，固定在培养基的接种孔中。如采用两点接种法可将一小块母种接在接种孔穴内，另一块接在孔口，火燎棉塞后即可塞好菌种瓶。一般一支母种试管可接原种6～10瓶（图9）液体母种时，可直接将培养好的菌液倒入原种瓶。一瓶液体菌种，可接12～15瓶原种。接种完毕用牛皮纸包好，扎上橡皮圈，即可移入培养室。
图9 原种接种方法示意图
1.取母种 2.塞母种试管棉塞 3.拔菌种瓶棉塞 4.母种送入菌种瓶内 5.盖好菌种瓶 6.长满菌丝的菌种瓶
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