在ELISA检测方法中，包被、封闭、洗涤分别代表什么实验过程?其主要作用是什么?

(1)单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。(2)单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。(改良双抗体夹心法)本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入的抗体b于第一次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免疫制备的，否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此，放大的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。

1.包被：用碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1-10μg/ml。在聚苯乙烯酶标板的每孔加100μl，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min。(一般商品化的试剂盒中已包被好抗体，此步骤可省略)

2.封闭：每孔加入200ul封闭液，37℃或室温孵育1-2 h。

3.洗涤：小心揭掉封板膜，放入洗板机，洗涤3-5遍。也可以手动洗板：弃去液体，每孔加入300ul洗液，浸泡1-2min，在吸水纸上拍干，重复3-5遍。(一般商品化的试剂盒中已包被好抗体，前三个步骤可省略)

4.加样：加适当稀释的待检样品100μl于上述已包被的反应孔中。(同时做空白孔，倍比稀释的标准品孔，有条件可加做阴性对照孔及阳性对照孔作为质控点)。