大肠杆菌感受态细胞的制备方法步骤谁能介绍下！

2024-11-03 03:43:12

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回答（1）：

大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法)
(1)
从新活化的E.coli
DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml
LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml
LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600nm，至OD600nm≤0.5时停止培养;
(2)
每组取培养液3个2ml转入2ml离心管中，在冰上冷却20-30min，于4℃，4000r/min离心10min(从这一步开始，所有操作均在冰上进行，速度尽量快而稳);
(3)
倒净上清培养液，用1ml冰冷的0.1mo1/L
CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰浴;
详细方法登陆生物帮了解下，
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