在酶促反应中，底物浓度与反应速度为矩形双曲线的关系。底物浓度很低时，反应速度随底物浓度增加而上升，而当底物浓度继续增加，一旦底物浓度达到相当高时，反应速度不再上升，达到极限最大值，称最大反应速度(Vmax)。当反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度为Km值，Km值亦称米氏常数，为酶的特征性常数。根据中间产物学说，推导出了一个方程式，其中Km值表示酶蛋白分子与底物的亲和力。
米氏方程：V=Vmax[S]/Km+[S](底物浓度)
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