贴壁细胞怎样进行传代？

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增。

对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶.而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶。

将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去; 加入0.25%胰酶溶液,视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多,以使充分浸润; 一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶壁半透明的细胞层,当见到出现细针孔空隙时,弃去胰酶溶液,并加入适量的细胞培养液终止消化; 视实验要求分入多瓶继续培养,一般为一传二到一传四的比例。

传代培养中的细胞传代培养(subculture),当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。

此时就需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养.这个过程就称为传代(passage)或者再培养(subculture),对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。